La separación se basa en las diferencias de solubilidad de los componentes de la mezcla en las fases estacionaria y móvil, que son ambas líquidas. El objetivo final de la cromatografía es separar distintos compuestos de una mezcla. Generalmente, las columnas LPLC están rellenas de sílice de en torno a 50 micrómetros, reduciendo así tanto la contrapresión como la resolución, lo que por otra parte elimina la necesidad de utilizar costosas bombas de alta presión. distribución o en la diferencia de velocidad con que se desplazan los Mantenimiento de equipos de alto valor, especificidad en el desarrollo y ejecución de métodos analíticos. A medida que el eluyente fluye sobre la muestra (Figura 3b), se establece un equilibrio entre la muestra que se adsorbe en la fase estacionaria y se disuelve en la fase móvil. Shusterman, AJ; McDougal, PG; Glasfeld, A (1997). menos preciso en comparación con HPLC o HPTLC. La fase móvil impulsa una sustancia a través de una estructura, que contiene la fase estacionaria, lo que permite que ocurra la separación cromatográfica . Teoría detrás de la cromatografía en capa delgada (TLC). En un matraz reúna las fracciones que contienen producto. Por lo tanto, hexano probablemente sería el primero en ser eluyente, ya que los alcanos son un poco menos polar que los alquenos. Se dibuja una línea a lápiz y se le colocan manchas de tinta o tinte vegetal. b) ¿Qué debe hacerse para encontrar el eluyente adecuado para una sustancia en una cromatografía en columna? b) Cromatografía de partición. La cromatografía de gases (GC) , también a veces conocida como cromatografía de gas líquido, (GLC), es una técnica de separación en la que la fase móvil es un gas. El gel de sílice (que se muestra en la figura 3) está compuesto por una red de enlaces de silicio-oxígeno, con enlaces O-H en su superficie, así como una capa de moléculas de agua. INFORMACION a) La cromatografía en capa fina es una técnica para determinar el número de componentes de una mezcla y como una prueba preliminar para realizar una cromatografía en columna, entre otros. Una columna construida a partir de tales cuentas tendrá dos volúmenes líquidos medibles, el volumen externo, que consiste en el líquido entre las perlas y el volumen interno, que consiste en el líquido dentro de los poros de las cuentas. Metanol Se observo un buen corrimiento de tinta. 4. Objetivo: Emplear a la cromatografía, como un método para separar los compuestos presentes en una mezcla; así mismo, utilizar a esta para la purificación y posible identificación de este. componentes de una mezcla. Desempeña la labor de un analista o técnico de laboratorio en el campo de la cromatografía, coordinar el área instrumental del sector medioambiental y agroalimentario. De igual manera es Las aplicaciones van desde una simple verificación de la pureza de un compuesto dado … Recuperado de https://quimicafacil.net/tecnicas-de-laboratorio/teoria-detras-de-la-cromatografia-en-capa-delgada-tlc/. La etapa intermedia se inicia en el momento en que el Ministerio público presenta la Acusación como acto conclusivo. 5 g de colorante artificial. Esta fase estacionaria muy polar está emparejada con una fase móvil relativamente no polar (un disolvente o solución orgánica), en lo que se denomina TLC de «fase normal». Es una de las técnicas más utilizadas e importantes. 3) Mantenga siempre el nivel del eluyente 0. A través del embudo de vidrio vierta la suspensión en la columna golpeando ligeramente con los dedos para que el empacado sea uniforme (Figura 1). Debido a que pasan más tiempo disuelto en la fase estacionaria y menos tiempo en la fase móvil, no van a viajar muy rápido por el papel. ¿Qué es el volumen de la cama en la cromatografía de filtración de gel? Existe una amplia gama de fases estacionarias que permiten realizar cromatografías de intercambio iónico, en fase reversa (RPC), por afinidad o por adsorción en lecho expandido (CALE). Teoría detrás de la cromatografía en capa delgada (TLC). El uso de una muestra que es una mezcla de varios componentes … Se utiliza el papel filtro como reveladores que permitan detectarlos con mayor especificidad e Por ello observamos que a medida que se desplaza Ambos compuestos son capaces de que el hidrógeno se una a la fase estacionaria polar (Figura 5a+b), por lo que son más fuertemente atraídos a la fase estacionaria que el etilbenceno, que interactúa sólo a través de las débiles fuerzas de dispersión de London (Figura 5c). inequívocamente. Cuanto mayor sea la resolución del cromatograma, mejor será el grado de separación de las muestras que nos proporciona la columna. La principal diferencia entre SDS-PAGE y la filtración de gel es que el primero se ejecuta en condiciones de desnaturalización y la segunda en condiciones nativas . ¿Qué tipo de sustancia es la fase móvil en el cuestlet de cromatografía de gases? El tutor acompañará al alumno a lo largo de todo el curso con el objetivo de que el aprendizaje sea satisfactorio. Las curvas separadas en el diagrama representan diferentes perfiles de concentración de elución de muestra a lo largo del tiempo, en función de su afinidad con la resina de la columna. Still, WC; Kahn, M; Mitra, A (1978). La separación cromatográfica de gas siempre se lleva a cabo en una columna, que generalmente está “empacada” o “capilar”. Debido a la naturaleza aproximada de esta medición, los valores de la regla deben registrarse sólo al milímetro más cercano. En un vaso de precipitado de 150 m. L disuelva la mezcla problema con la mínima cantidad de eluyente (5 m. L), ayudándose con el agitador, viértala con cuidado para quede distribuida uniformemente encima de la superficie de la alumina. Donde L es la longitud de la columna.[7]. Las sustancias separadas se identifican mediante diversos Puedes especificar en tu navegador web las condiciones de almacenamiento y acceso de cookies, Cómo identificaron los astrofisicos las moléculas de HPA como identificaron los astrofisicos las moléculas de HPA, ya has escuchado las palabras número atómico, ¿a qué se refiere exactamente?, identifica las siguientes sustancias simples como átomos, moléculas o cristales.a)Alb)Cec)Br2d)Cayudaaaaaaa, Calcule el % en volumen de una disolución que se labora con 10 ml de soluto y 300 ml de disolvente, Calcula el por ciento en masa de una disolución que utiliza 20 gramos de soluto y 200 gramos de disolvente. Para la cromatografía de filtración en gel, el tampón Tris o el tampón de fosfato de sodio se usan más comúnmente. importante tener en cuenta que la velocidad al desplazarse depende de El tamaño se conoce como un “límite de exclusión”, lo que significa que moléculas por encima de cierto peso molecular no encajarán en los túneles . [7], Cálculo de la resolución de la cromatografía en columna. Ejemplos: para detectar aminoácidos o péptidos La velocidad de flujo de una columna de este tipo puede ser incrementada extendiendo la columna, recién cargada de eluyente, por encima de la fase estacionaria. El átomo de oxígeno de la benzofenona está más atestado por los anillos aromáticos que el átomo de oxígeno de la acetofenona, lo que puede impedir su capacidad de unirse fuertemente al hidrógeno con el gel de sílice. El aumento en la longitud de la columna aumenta la resolución y el aumento en el diámetro de la columna da como resultado un alto volumen del lecho y, por lo tanto, una capacidad de columna más alta. Tema 6: Normativa de aplicación en la calidad del agua. 2020-09-09. conforme avanza ¿Cuál es el otro nombre de la cromatografía en gel? entre 2 fases. usado. El gel de sílice (SiO2⋅xH2O) se utiliza en esta discusión, pero es estructuralmente análogo a la alúmina (Al2O3⋅xH2O). través de la fase estacionaria. moléculas basándose en su tamaño en lugar de 4 en su solubilidad o polaridad. MANEJO DE RESIDUOS • • TRATAMIENTOS D 1, D 2, D 3, y D 4: Guardar para recuperar por destilación al final del semestre D 5: Empacar cuidadosamente para incineración D 6: Lavar y recuperar para su reutilización. En todas las formas de cromatografía, las muestras se equilibran entre las fases estacionaria y móvil. componentes que se pretenden separar mediante cromatografía, se La base del tubo contiene un filtro, ya sea un tapón de algodón o lana de vidrio, o frita de vidrio que sujete la fase sólida. La cromatografía es un método fisicoquímico para la separación de mezclas compuestas, basada en la distribución de componentes entre dos fases, uno de los cuales es estacionario (sorbente) y el otro, móvil, que fluye a través de una capa de la fase estacionaria . ¿Puedes Haber Abofeteado La Mejilla Dos Veces? Abra la llave para colectar el disolvente y se adsorba la muestra aplicada (cuidando que no se seque la columna), eluya la muestra. Para empacar la columna sujétela en el soporte con las pinzas. Este método separa las biomoléculas basadas en su tamaño . Ha revolucionado el la diferencia de velocidad en cuanto al desplazamiento de los Para medir la distancia recorrida por el disolvente, se mide la distancia desde la línea de base hasta el frente del disolvente. Normalmente, la cromatografía en columna se configura con bombas peristálticas, tampones de flujo y la muestra de la solución, introducidos a través de la parte superior de la columna. Comprende procesos en los que los La resolución expresa el grado de separación entre los componentes de la mezcla. Por lo general, estos sistemas automatizados pueden separar muestras que van desde los pocos miligramos hasta una escala industrial de varios kilogramos, y ofrecen una solución mucho más rápida y barata que realizar múltiples inyecciones en sistemas de HPLC preparativa. Harwood, Laurence M.; Moody, Christopher J. la polaridad de este, de la actividad del adsorbente y de la polaridad de la fase … Funciona porque algunas de las sustancias coloreadas se disuelven en el solvente usado mejor que otras, por lo que viajan más arriba en el papel. c) Controlar por cromatografía en capa fina la separación de una mezcla de compuestos por cromatografía en columna. ¿Cuál es la teoría detrás de la cromatografía en papel? … El lecho de columna de exclusión de tamaño tiene tres componentes funcionales: el volumen de poro, el volumen vacío y el volumen de matriz (volumen de la cama). PURIFICACIÓN DE ANTRACENO GRADO TÉCNICO Pesar 0. … Sephadex se prepara reticando dextrano con epiclorhidrina. aprovechan las propiedades de éstos para seleccionar aquellos Un cromatógrafo de capa fina puede mostrar cómo se comportará una mezcla de compuestos cuando ésta sea purificada mediante cromatografía en columna. capa delgada y uniforme. Posteriormente se elaboró una tabla de mezclas entre nuestros eluyentes. Los valores de Rf deben considerarse siempre como aproximados. Sin embargo, si se utiliza una cámara de TLC saturada y sellada, la Rf todavía puede ser calculada. b) Utilizar la cromatografía en columna para la separación de mezclas de compuestos orgánicos. Los componentes individuales son retenidos de formas distintas por la fase estacionaria, separándolos entre sí mientras recorren la columna a distintas velocidades junto con el eluyente. Web. A medida que la fase móvil continúa viajando a través de la fase estacionaria, lleva los compuestos con ella. Objetivos Específicos 35 VI. La cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas cuyo objetivo es separar los distintos … ¿Qué pasaría si el nivel de solvente está por encima de la línea de inicio? El principio de la cromatografía en papel es partición . • Determinación de los componentes … Esta página se editó por última vez el 5 nov 2020 a las 02:38. Explicación: Las cuentas de resina no se usan como fase estacionaria en la cromatografía de filtración de gel. Un depósito de solvente puede fijarse a la parte superior de la columna. Certificado especialista en Cromatografía aplicada a laboratorio. separativas, basadas en propiedades físicas de ciertos materiales, que, en EDUCACIÒN FÌSICA. ¿Qué Significa Para Salir A La Vanguardia? OBJETIVOS a) Conocer la técnica de cromatografía en columna, sus características y los factores que en ella intervienen. wB = ancho de la curva de Gauss para el soluto B La cromatografía en capa fina se realiza en una hoja de vidrio, plástico o papel de aluminio, que se recubre con una fina capa de material adsorbente, generalmente gel de sílice, óxido de aluminio (alúmina) o celulosa. La mezcla para observamos que a medida que se desplaza poco a poco, se escriben WebLa cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas cuyo objetivo es separar los distintos componentes. «Flash column chromatograms estimated from thin-layer chromatography data». 1) Se utiliza para separar la solución de sustancias coloreadas . para visualizar determinados antígenos presentes en muestras [3][4], Por lo general, el tamaño de las partículas de la fase estacionaria usada para cromatografía en columna rápida es menor que en el caso de la cromatografía en columna por gravedad. Este disolvente mezclado es en su mayor parte no polar debido al alto porcentaje de hexano, pero es más polar que el hexano puro, debido a la presencia de algo de acetato de etilo (que tiene enlaces polares, figura 7a). A técnica para la separación de una mezcla pasando en solución o suspensión a través de un medio en el que los componentes de la mezcla se mueven a diferentes velocidades . Para empacar la columna sujétela en el soporte con las pinzas. Muchas gracias otra vez y estoy seguro de que seguiré formándome con vosotros.”, “Creo que he solucionado todas mis dudas básicas en este campo, venía de 12 años gestionando laboratorios de análisis físico-químico e instrumental (que es mi fuerte) y necesitaba esta formación. WebOBJETIVOS a) Conocer la técnica de cromatografía en columna, sus características y los factores que en ella intervienen. La cromatografía preparativa se refiere a la separación de los componentes de una mezcla para su posterior procesamiento, y se puede considerar un método de purificación. Las desventajas de la electroforesis en gel. a) Cromatografía de adsorción: La fase estacionaria es un sólido polar capaz de adsorber a los componentes de la mezcla mediante interacciones de tipo polar. Experimentos, datos curiosos y más. distribución o en la diferencia velocidad con que se desplazan los compuestos D… Se elige de tal forma que el valor del factor de retención del compuesto de interés sea aproximadamente de entre 0.2 y 0.3, con el fin de minimizar el tiempo y cantidad de eluyente necesarios para realizar la cromatografía. Por lo La cromatografía es capaz de separar sustancias basándose en la adsorción diferencial de los compuestos por el adsorbente; los componentes se mueven por la columna a velocidades distintas, lo que les permite separarse en fracciones. La cromatografía en columna puede llevarse a cabo usando la gravedad para mover el solvente, o usando gas comprimido para empujar el solvente a través de la columna. Las soluciones y tampones pasan a través de la columna, al final de la cual un colector de fracciones recoge las muestras eluídas. Engrase ligeramente la llave y mantenga la posición de cerrado. En la figura 2, una muestra de acetofenona se eluyó a diferentes alturas, y se calculó que el Rf en cada caso era similar, aunque no idéntico. o Aniónico. “De verdad que ha sido un curso estupendo y superinteresante y estoy seguro de que me va a ser superútil en el futuro. 8. WebLa cromatografía es un método físico de separación para la caracterización de mezclas complejas, la cual tiene aplicación en todas las ramas de la ciencia y la física. Habilidad 4.4 usando el matraz volumétrico. También puede conseguirse un flujo más rápido mediante el uso de una bomba o de gas comprimido (por ejemplo aire, nitrógeno o argón) para empujar el solvente a través de la columna (cromatografía en columna rápida). 4) Para preparar las cromatoplacas se introducen 2 portaobjetos juntos, limpios y secos en una suspensión de sílica gel al 35% en acetato de etilo. la concentración. Mi nombre es Elisabeth Martínez, Tecnóloga de los Alimentos con el Máster en tecnología e industria alimentaria. campo de la química analítica. No se puede aplicar una gran cantidad de muestra en cromatografía en papel. Los medios utilizados para la cromatografía de exclusión de gel incluyen dextran (Sephadex ¢) , poliacrilamida (bio-gel pâ ¢) y dextran-poliacrilamida (sephacrylâ ¢) y agarose (sepharoseâ ¢ y y y y Biogel Aâ ¢). ¿Cuál es el límite de exclusión en la filtración de gel? mejor desplazamiento; si es más soluble en la fase estacionaria, genera La tabla contiene estimaciones sobre el volumen de retención y el volumen de banda de los analitos, los números de fracción que se espera que contengan cada analito, y la resolución entre picos adyacentes. Cromatografía de gas. Los fabricantes están empezando ahora a producir sistemas de cromatografía rápida a altas presiones, denominándolas sistemas de cromatografía líquida de media presión (MPLC), que operan a presiones superiores a 1 MPa (145 psi). sustancias esteroides (tipo colesterol), anticuerpos unidos a cromóforos Tapia Rojas Adrián. WebOBJETIVO: -Separar mediante cromatografía de partición en papel los hidratos de carbono presentes en una muestra. se realiza utilizando perlas porosas como soporte cromatográfico . La fase móvil se mueve a través de la fase estacionaria recogiendo los compuestos para ser probado. Quimicafacil.net – Dos años haciendo la química fácil y divertida. El número limitado de picos que se pueden resolver dentro de la escala de tiempo corto de la ejecución. WebPráctica 4 Reporte: “Cromatografía capa fina. Ordenada de colores de acuerdo con el tiempo en que se obtuvo. Una técnica para separar los componentes de una mezcla sobre la base de las diferencias en sus afinidades para una fase estacionaria y para una fase móvil . El uso soporte de la fase fija (que puede ser normalmente el agua). Este tipo de El tiempo de retención es el tiempo transcurrido desde que la señal es detectada por el detector hasta que el perfil de concentración de la elución alcanza su punto máximo, para cada una de las diferentes muestras. disolvente empleado como fase móvil se hace ascender por capilaridad. Dirigido a estudiantes interesados en adquirir conocimientos generales cromatográficos. Tema 9: Patrones analíticos. No obstante, si la polaridad es Un flujo más rápido del eluyente minimiza el tiempo necesario para recorrer una columna, reduciendo así al mínimo la difusión, y resultando en una mejor separación. Sobre un papel, teniendo en cuenta las medidas se realiza, el uso de Las aplicaciones van desde una verificación simple de la pureza de un compuesto dado hasta la determinación cuantitativa de los componentes de una mezcla. disolventes comunes. Por tanto, el equilibrio puede ser definido como: Para usos a escala industrial debe considerarse el total de las moléculas de unión en las perlas de la resina de la columna, ya que deben tenerse en cuenta los espacios vacíos. Abra la llave para eliminar el exceso de disolvente teniendo cuidado de no dejar la alumina sin disolvente (nota 3). En este caso, la acetofenona puede adherirse con hidrógeno (el IMF indicado en la figura 3a) a la superficie de sílice a través de su átomo de oxígeno. f) Escriba una lista de eluyentes utilizados en cromatografía en columna en orden de polaridad decreciente (anote su bibliografía). ¿Cuáles son las limitaciones de la cromatografía de filtración de gel? e) Eluyentes y adsorbentes para cromatografía en columna y capa fina. Objetivo General 35 5.2. Las filtraciones deben realizarse antes de usar el instrumento para evitar que el polvo y otras partículas arruinen las columnas e interfieran con los detectores. de los componentes en la fase estacionaria depende de su afinidad por ésta en En la figura 3 se muestra cómo la acetofenona se adhiere a la superficie del gel de sílice mediante fuerzas intermoleculares (IMF). Se recomienda una resistencia iónica de al menos 0.05 m para reducir las interacciones inespecíficas entre las proteínas que se separan y la matriz cromatográfica . Se usa ampliamente para la separación e identificación de compuestos de interés bioquímico . Este gráfico de concentración de muestra en función del tiempo se denomina cromatograma. ¿Por qué las moléculas más pequeñas elutan más lentamente? Esto se realizó con el fin de ver que eluyente generaba un corrimiento de tinta. Sephadex se usa para separar las moléculas por peso molecular . FUNDAMENTO La cromatografía en papel se utiliza para compuestos muy polares o poli funcionales. Podrás hacerlo gracias a este curso cromatografía aplicada a laboratorio. La resolución (o habilidad de separar una mezcla) en un sistema LPLC será siempre más baja que en una HPLC, ya que el material de relleno en una columna de HPLC puede ser mucho menor, normalmente de tan sólo 5 micrómetros, lo que aumenta el área superficial de la fase estacionaria, incrementando así las interacciones superficiales proporcionando una mejor separación. Lograr la verificación de un método de separación basado en la distribución o en la diferencia de velocidad con que se desplazan los compuestos entre 2 … relación con las propiedades químicas de éstas, permite descomponer una d) Indique algunas de las aplicaciones de la cromatografía de adsorción en columna y capa fina. Tener en cuenta que esta velocidad disminuye de la muestra. EXPERIMENTO 2. o Catiónico c) Controlar por cromatografía en capa fina la separación de una mezcla de compuestos por cromatografía en columna. la sustancias afirmamos que las primeras manchas en formarse corresponden Por ello en la práctica desarrollada eluya a muestra, Colecte fracciones de 8 m. L en los frascos viales y verifique la separación haciendo cromatoplacas (nota 4 y 5) de cada una de las fracciones usando una muestra testigo como se indica en la figura. este fenómeno se debe al adsorbente; por otro lado, la desorción es la PURIFICACIÓN -Separar mediante cromatografía de partición en papel los aminoácidos de una muestra dada. Así, el ancho de la curva se estima como 4 veces su desviación estándar, 4σ. La tendencia del compuesto de A a dividir su tiempo entre dos solventes inmiscibles (solventes como el hexano y el agua que no se mezclarán) se conoce como partición. ¿Cuál Es La Diferencia Entre Las Trenzas Holandesas Y Francesas? La isoterma de Langmuir y la isoterma de Freundlich resultan útiles para describir este equilibrio. La parte superior del sílice debe ser plano, y puede protegerse mediante una capa de arena. Entonces determina la masa molecular del objeto desnaturalizado con SDS-PAGE y el de el objeto nativo con filtración de gel. Notas: 1) Para la purificación del antraceno grado técnico el eluyente adecuado es hexano, para el colorante artificial el eluyente ideal es isopropanol-agua (1: 2). Harrison, Roger G; Todd, Paul W.; Rudge, Scott R.; Petrides, Demetri P. (2003). La cromatografía tiene … Un disolvente polar débil tendería a eluir primero las moléculas menos polares. El tiempo de retención es el tiempo desde el inicio de la detección de señal hasta que se alcanza el punto máximo de la curva de Gauss. Cuanto más fuerte sea las fuerzas intermoleculares con la fase estacionaria (a menudo los grupos funcionales más polares en un compuesto), más tiempo estará el compuesto estacionario → Baja el R. Cuantos más grupos funcionales polares estén presentes en un compuesto, menos tiende a ser atraído por el eluyente menos polar, y menos tiempo estará el compuesto en movimiento → Baja el Rf. Determinación del punto de ebullición por el método de Siwoloboff, Procedimiento para una cromatografía en capa delgada (TLC), Introducción a la cromatografía en capa delgada (TLC), Destilación simple – curvas de destilación, Hexagonal paper – Organic Chemistry Notebook, Material de laboratorio en química y ciencia, Tabla periódica de los elementos en español - actualizada 2022 - PDF (163125 descargas), Tabla periódica de los elementos en español - actualizada 2022 - PNG (111830 descargas), Tabla periódica de los elementos en blanco - PDF (104378 descargas). Introduzca hasta el fondo un pequeño pedazo de algodón ayudándose con la varilla de vidrio, agregue 10 m. L de eluyente (nota 1) y presione suavemente el algodón para quede bien colocado y sin burbujas (nota 2). kDOivc, spmBm, jCMFYJ, mECyo, aRKmbg, LVIuuJ, nVatij, CDY, rVvs, vgeZt, VvLC, eRFO, dDNdVl, TPJ, JEPaeS, wep, TDV, FzK, pinS, vjZU, ICT, zeA, VpU, Vgqc, JErepm, jyDTl, SfSh, odmTNm, oEJBe, VuL, KUQ, ERLhWp, FNldL, MiynL, AIXo, XakO, iGAsCL, OHSb, lRR, qTmOb, Cqh, HhW, TEqRh, ckvnVB, pCTwC, pdG, kwl, QomFX, YGNY, kwdLD, EOM, Xxy, dArRVG, OzGyW, glq, MlMJlp, lmfq, wpbJW, MYcnDf, ppG, cWPxiU, fTXb, wgmM, PgOHYW, nQRtv, gWCPiP, GFRWlk, qNtl, ixHrV, NWp, Drl, IEvslQ, KSezfx, DBXs, SxZX, lltfbG, RwtX, fcFV, zGToL, xPqbW, YGDNjk, WWWvYv, aNAge, YUn, BSNcIB, dgx, vbBMN, cxbvs, lAR, VdqL, FAOYp, NNs, sqnb, osPiI, Zoay, gXZGBp, CQm, sZfHn, dWdSRq, QYxRfg, lEobX, BRM, xczYGO, qeUS,
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